Pengesanan antigen spesifik prostat (PSA) menggunakan lektin spesifik asid sialik berdasarkan kaedah terlabel dan tak terlabel

Abstract

Pengesanan glikan asid sialik pada antigen spesifik prostat bebas (fPSA) boleh digunakan untuk meningkatkan kespesifikan ujian saringan kanser prostat (PCa). Lazimnya, teknik pengesanan glikoprotein memerlukan lektin sebagai molekul pengecam utama, misalnya dalam kaedah terlabel seperti asai lektin terangkai-enzim (ELLA) dan kaedah tak berlabel seperti biosensor impedimetrik menggunakan spektroskopi impedans elektrokimia (EIS). Kedua-dua kaedah ini berpotensi diaplikasikan untuk kegunaan klinikal, namun kepekaan ELLA dibataskan oleh isyarat tidak spesifik antara komponen asai. Justeru, kajian ini memfokuskan pengoptimuman langkah pembasuhan dan penghalangan dalam ELLA untuk memperoleh isyarat latar belakang minimum. Biosensor lektin pula dijadikan teknik bandingan untuk mengesan fPSA menggunakan lektin spesifik asid sialik iaitu aglutinin Maackia amurensis (MAA) dan aglutinin Sambucus nigra (SNA). Sebanyak tiga parameter penimbal basuhan iaitu kitaran basuhan, kepekatan NaCl dan kepekatan Tween® 20, manakala empat jenis penimbal penghalang yang diuji adalah ELISA Synblock, Carbo-free™, serum anak lembu (BSA) dan alkohol polivinil (PVA). Profil glikan fPSA daripada individu normal menunjukkan kandungan glikan α2,6-asid sialik yang lebih tinggi berbanding glikan α2,3-asid sialik. Selain itu, ELLA berkeadaan optimum pada empat kali kitaran basuhan dengan kehadiran NaCl 0.5 M dan Tween® 20 pada 0.05% dalam penimbal basuhan. Penggunaan penimbal penghalang didapati tidak signifikan dan boleh disingkirkan, sekali gus dapat mengurangkan tempoh pengasaian sehingga tiga jam. Nilai KD,app pada 12.38 nM yang ditentukan menggunakan ELLA pula menunjukkan keafinan tinggi SNA terhadap fPSA dengan had pengesanan (LOD) pada 20.15 ng/mL. Berbanding ELLA, nilai LOD bagi biosensor lektin adalah 6.8 kali lebih rendah iaitu 2.98 ng/mL, justeru menunjukkan kemampuannya untuk mengesan fPSA pada julat klinikal (<4.0 ng/mL). ELLA yang dioptimumkan pula sesuai digunakan untuk menentukan profil glikan dan penentuan afiniti lektin-glikoprotein kerana truput yang tinggi.