Pembangunan asai amplifikasi isoterma berpengantara gelung (lamp) untuk pengesanan mikrosporidia (enterocytozoon bieneusi) dalam spesimen tinja manusia

Abstract

Mikrosporidia muncul sebagai patogen oportunistik dan kebanyakan jangkitannya menyebabkan diarea kronik pada pesakit terimunokompromi. Diagnosis rutin mikrosporidia bergantung kepada pemeriksaan mikroskopik menggunakan mikroskop cahaya. Namun, interpretasi slaid amat sukar kerana saiz sporanya yang terlalu kecil. Pengesanan molekular dengan kaedah tindak balas rantai polimerase (PCR) pula memakan masa dan memerlukan mesin kitaran terma yang membataskan penggunaannya terutama di makmal-makmal yang kekurangan peralatan. Amplifikasi isoterma berpengantara gelung (LAMP), adalah satu kaedah pengesanan molekular berprestasi tinggi yang merupakan satu alternatif praktikal yang agak mudah, pantas dan tidak memerlukan peralatan canggih. Oleh itu, tujuan kajian ini adalah untuk membangunkan asai LAMP bagi mengesan DNA Enterocytozoon bieneusi dalam spesimen tinja manusia. Empat primer khusus untuk E. bieneusi telah direkabentuk sepadan dengan jujukan gen SSU rRNA dan diuji ke atas 100 sampel tinja yang diperoleh daripada Orang Asli. Teknik LAMP dilakukan pada ketetapan suhu 60°C selama satu jam. Produk amplifikasi dianalisa menggunakan reagen pengesanan pendarfluor (FDR) dan elektroforesis gel. Sebanyak 39 daripada 100 sampel tinja (39%) adalah disahkan positif terhadap E. bieneusi menggunakan LAMP berbanding PCR (33/100; 33%) dan pemeriksaan mikroskopik (32/100; 32%). Sensitiviti, spesifisiti dan persetujuan diagnostik di antara pemeriksaan mikroskopik, PCR dan LAMP juga telah dinilai dan dibandingkan. LAMP memberikan nilai sensitiviti sebanyak 94% dan spesifisiti 88% berbanding pemeriksaan mikroskopik (sensitiviti = 48%, spesifisiti = 76%). Tiada perbezaan signifikan dalam pengesanan positif E. bieneusi didapati oleh ketiga-tiga kaedah ini (nilai–p = 0.530). Bagaimanapun, LAMP mempamerkan persetujuan diagnostik yang teguh dengan PCR (κ = 0.78) manakala persetujuan diagnostik yang wajar ditunjukkan di antara kaedah pemeriksaan mikroskopik dan PCR (κ = 0.25). Kesimpulannya, asai LAMP E. bieneusi telah berjaya dibangunkan dan aplikasinya di makmal-makmal diagnostik adalah disyorkan untuk pengesanan E. bieneusi yang lebih sensitif dan spesifik dalam spesimen tinja manusia.