https://ptsldigital.ukm.my/jspui/handle/123456789/388901 2026-06-09T04:16:04Z https://ptsldigital.ukm.my/jspui/handle/123456789/783585 Title: Pembentukan kornea gantian menggunakan sel stem mesenkima dari sum-sum tulang melalui teknologi kejuruteraan tisu Authors: Rohaina Che Man (P50282) Abstract: Lapisan epitelium kornea dikekalkan oleh sel stem limbal. Kehilangan sel stem limbal boleh menyebabkan kebutaan di mana epitelium limbal gagal berfungsi secara normal dan digantikan dengan epitelium konjunktiva dan salur darah. Sum-sum tulang telah dikenalpasti sebagai sumber sel progenitor untuk sel epitelium dan endotelium. Objektif kajian ini adalah untuk membentuk kornea gantian menggunakan sel stem mesenkima sum-sum tulang manusia (BMSCs) melalui teknologi kejuruteraan tisu seterusnya merawat kecacatan kornea pada model tikus atimik. Bagi pembentukan kornea gantian, BMSCs pada subkultur pertama telah dituai dan disemai di atas membran amniotik (AM) di dalam sistem kultur bersama "transwell" dengan kehadiran sel fibroblas (NIH3T3) yang tidak aktif sebagai sel bawahan. Pengaruhan dengan menggunakan alkali telah dilakukan ke atas tikus atimik untuk mengurangkan populasi sel stem limbal. Kornea gantian kemudiannya diimplan pada mata tikus atimik yang cedera selama 8 minggu. Ini diikuti dengan analisis lampu slit dan analisis Optical Coherence Tomography (OCT) secara bersiri. Analisis kuantitatif ekspresi gen menunjukkan peningkatan gen ẞ-integrin (2.75×10 4.85×102; p<0.05), C/EBP8 (2.63×1036.77x10; p<0.05), ABCG2 (2.32×105 ± 4.74×10; p>0.05) dan p63 (9.57×103.53×107; p<0.05) dalam BMSCs yang diaruh jika dibandingkan dengan BMSCs yang tidak diaruh. Manakala tiada pengekspresan gen CK3 berlaku pada kedua-dua kumpulan. Analisis immunositokimia menunjukkan adanya pewarnaan positif untuk CK3 (54.07 1.33; p<0.05) dan p63 (70.10 1.84; p<0.05) dalam BMSCs yang diaruh tetapi sebaliknya tiada pengekspresan pada BMSCs yang tidak diaruh. Kumpulan rawatan yang menggunakan kornea gantian menunjukkan bahawa penilaian lampu slit menunjukkan penjanaan semula kornea yang baik dari sudut kejelasan kornea dan pengurangan pembentukan baru salur darah jika dibandingkan dengan kumpulan kawalan yang lain. Kumpulan rawatan dengan sel mencapai tahap ketebalan kornea paling tinggi jika dibandingkan dengan kumpulan lain seperti yang ditunjukkan oleh analisis histologi dan OCT (BMSCs: 276.50 ± 4.77; AM: 129.11 ± 5.04; Kawalan: 244.50 5.63). Rawatan dengan BMSCs yang diaruh telah mencapai 4 hingga 5 lapisan epitelium yang teratur dan lapisan stromal yang padat menyerupai kornea normal. Analisis immunohistokimia menunjukkan kumpulan rawatan BMSCs dengan kombinasi AM dan kumpulan rawatan dengan AM sahaja menunjukkan pengekspresan protein CK3 dan p63 semasa proses regenerasi kornea yang baru. Sebaliknya, di dalam kumpulan kawalan, tiada pengekspresan protein yang ditunjukkan. Kesimpulannya, kajian ini menunjukkan bahawa sel BMSCs yang telah diaruh dan disemai ke atas AM boleh digunakan sebagai kornea gantian untuk merawat masalah kekurangan sel stem limbal akibat kecederaan alkali. 2014-04-10T00:00:00Z https://ptsldigital.ukm.my/jspui/handle/123456789/783584 Title: Effect of dermal fibroblasts conditioned medium (DFCM) on IN VITRO skin re- epithelialization Authors: Nurul' Izzah Haji Abdul Ghani (P72936) Abstract: A key event in wound healing is re-epithelialization, which is accomplished by the proliferation, migration, and differentiation of epidermal keratinocytes. These processes are mainly regulated via paracrine signaling of cytokines, chemokines and growth factors secreted by dermal fibroblasts. Impaired epithelialization, which is prevalent in chronic wounds and aging skin, is caused by lack of these essential factors. In vitro cell culture and protein extraction techniques enables collection of fibroblasts secreted factors from the waste medium as dermal fibroblast conditioned medium (DFCM), which could facilitate re-epithelialization during wound healing. The aim of the current study was to elucidate the effect of DFCM on in vitro re- epithelialization process i.e. keratinocyte attachment, proliferation, migration, and differentiation. Skin samples were collected from consented donors to isolate fibroblasts and keratinocytes. DFCM was prepared by culturing confluent fibroblasts with serum-free keratinocyte-specific (DFCM-KM) and fibroblast-specific (DFCM- FM) medium. Keratinocytes supplemented with DFCM were observed under time- lapse imaging to evaluate attachment, proliferation, and migration. The scratch assay was performed to assess keratinocytes rate of healing. DFCM collected with 3-day incubation of confluent fibroblasts (DFCM-KM-3 and DFCM-FM-3) were resulted in enhancement of keratinocyte re-epithelialization process compared to 1-day and 2-day incubation. It was also found that DFCM-KM-3 significantly enhanced keratinocyte attachment (77.66×10215.15×102 cells/cm2) compare to control (64.36×102+10.31×102 cells/cm3) and DFCM-FM-3 (50.58×10219.83×10 cells/cm2) (p<0.05). While, DFCM-FM-3 significantly increased keratinocyte wound healing (155.4×10 +5.24×102 um2/h) compare to control (115.5×10243.25×102um3/h) and DFCM-KM-3 (120.1x10 +5.24×102um2/h) (p<0.05). Moreover, supplementation of DFCM-FM-3 resulted in the enlargement of keratinocyte area and demonstrated collective migration during healing, which was distinctly different from keratinocytes supplemented with DFCM-KM-3 and on control condition. Further analysis confirms that the presence of high calcium in DFCM-FM-3 facilitated the changes. Also, to understand the effect of DFCM on re-epithelialization of aging skin, DFCM was supplemented to keratinocytes from 3 different age groups (≥18-35 years, 36-54 years and ≥55 years). It was found that irrespective of donor age, DFCM-KM-3 enhances keratinocyte attachment while DFCM-FM-3 enhances keratinocyte healing rate, indicating the potential application of DFCM for impaired re-epithelialization. 2017-03-08T00:00:00Z https://ptsldigital.ukm.my/jspui/handle/123456789/783357 Title: Regenerasi tulang alveolar melalui kaedah kejuruteraan tisu bagi memudahkan penggantian implan pergigian pada tulang alveolar atrofik - kajian pada model haiwan Authors: Sharen@Sharen Aini Shamsuddin (P50281) Abstract: Resorbsi tulang alveolar sering berlaku disebabkan oleh kehilangan gigi, penyakit periodontal dan trauma. Graf tulang autologus yang diperolehi daripada kresta iliak merupakan rawatan yang sering digunakan, walaubagaimananapun kaedah pengambilannya terhad disebabkan oleh kekurangan graf tulang sekiranya graf yang diperlukan adalah amat besar dan boleh menyebabkan kecederaan disekitar kawasan pembedahan. Objektif kajian ini adalah untuk mengaplikasi teknik kejuruteraan tisu untuk regenerasi tulang alveolar menggunakan sel stem sum-sum tulang autologus. Campuran sel stem mesenkima sum-sum tulang (BMSCs) dan gam fibrin disemai ke atas granul beta-trikalsium fosfat dan hidroksiapatit (B-TCP/HA) untuk proses regenerasi semula tulang alveolar dalam model haiwan besar; Macaca fascicularis. BMSCs diambil dari bahagian tulang femur, diproses dan dikultur di dalam a-Minimal Essential Medium (a-MEM) yang mengandungi 10% serum anak lembu (FBS) serta 5% serum autologus bagi menambahbaik teknik kultur sel. Media pengaruhan osteogenik pula menggunakan 0.2mM asid askorbik-2-fosfat, 10mM ẞ-gliserofosfat dan 10-8 M deksametason. Lebih kurang 3 x 10'sel dicampurkan ke dalam fibrin autologus sebelum disemai ke atas granul ẞ-TCP/HA dan dieram di dalam inkubator selama 24 jam bagi membantu proses pelekatan sel. Konstruk ini diimplan ke atas Macaca fascicularis yang telah dilakukan defek pada tulang alveolarnya. Selepas 12 minggu proses implantasi, tulang alveolar akan dituai. Penambahbaikan teknik pengkulturan untuk BMSCs Macaca fascicularis dengan menggunakan gabungan FBS dan serum autologus menunjukkan penggandaan sel yang amat baik iaitu dari 22.00 3.61 hari kepada 4.56 ± 0.66 hari berbanding dengan FBS sahaja. Viabiliti sel juga meningkat dari 61.72 ± 3.37% kepada 89.20 1.42%. Keputusan daripada teknik imbasan mikroskop elektron telah menunjukkan adanya kehadiran matriks kolagen dan sel seperti osteoblast membuktikan pembentukkan tulang baru. Analisis imbas mikro tomografi berkomputer (micro CT scan) mengesahkan bahawa adanya kehadiran tisu tulang disekeliling granul ẞ-TCP/HA yang belum terlarut dikawasan defek tulang alveolar. Pengukuran tulang alveolar menunjukkan peningkatan ketinggian tulang yang signifikan iaitu dari 2.75 ± 0.52mm kepada 8.00 ± 0.36mm dengan nilai p< 0.05. Gambaran histologi dengan pewarnaan hematoksilin dan eosin mengesahkan wujudnya integrasi yang baik diantara tulang hasil kejuruteraan tisu dan tulang alveolar asal. Kesimpulannya, kombinasi serum autologus dengan 10% FBS menyebabkan pertumbuhan BMSCs berlaku pada kadar yang pesat dan seterusnya hasil kombinasi BMSCs bersama fibrin autologus yang disemai ke atas ẞ-TCP/HA boleh digunakan untuk merawat penyusutan tulang alveolar pada model Macaca fascicularis. 2014-04-10T00:00:00Z https://ptsldigital.ukm.my/jspui/handle/123456789/783356 Title: The effect of Centella Asiatica (L.) urban on an organotypic spinal cord model Authors: Nur Nabilah Ahmad Puzi (P70832) Abstract: Centella asiatica (L.) Urban (CA) terkenal sebagai tumbuhan herba untuk meningkatkan fungsi otak dan ingatan dalam perubatan tradisional Cina dan Melayu. Secara saintifik, kesan neurogeniknya terbukti pada sel saraf dan hippocampus tikus. Kesannya terhadap saraf tunjang (ST) belum dikaji secara meluas walaupun kesan kecederaan ST (KST) boleh menyebabkan kelumpuhan anggota badan dan perubatan moden tiada rawatan untuk menyembuhnya. Matlamat kajian ini adalah membina model organotipik ST (MOST) dan menyiasat kesan neurotrofik ekstrak mentah CA (raw extract of CA; RECA) ke atas MOST. MOST disediakan dengan menggunakan hirisan ST yang dihasilkan melalui penghirisan ST anak tikus dengan vibratom dan setelah pembenaman ST dalam blok gel. Untuk itu, ketumpatan gel mestilah setimpal dengan ST, frekuensi dan amplitud getaran bilah (GB) perlu dioptimumkan, dan ketebalan hirisan ST yang dihasilkan perlu mempunyai berkebolehhidupan 100% dalam kultur. Di akhirnya, parameter optimum adalah; menggunakan anak tikus berumur 8 hari, 10% gelatin, GB dengan amplitud 10 dan frekuensi 1, menghasilkan hirisan berketebalan 300 um yang mempunyai kebolehhidupan 100% selama 8 hari pengkulturan. RECA disediakan pada kepekatan 0, 100, 200 400 dan 800 μg/ml dan ditambahkan ke dalam media MOST selama 7 hari. Seterusnya, hirisan ST pewarnaan- imuno dilakukan terhadap protein TUJ-1 dan GFAP dan imej direkodkan dengan mikroskop berpendarfluor. Min bilangan neurit, min panjang neurite, min neurit terpanjang dan min nisbah pertumbuhan diukur pada imej yang diperolehi. Ujian Anova dan Kruskal-Wallis mendapati tiada perbezaan signifikan di antara kumpulan. Ini berkemungkinan kerana kandungan bahan bioaktif neurotrofik yang rendah di dalam RECA yang boleh diakibatkan oleh perbezaan geografi dan kaedah pengekstrakan berbanding ekstrak lain dan juga hipotesis bahawa bahan aktif di dalam RECA hanya boleh bertindak secara sinergis dengan NGF untuk menghasilkan kesan neurotrofi. Kesimpulannya, MOST boleh dihasilkan menggunakan vibratom dan adalah alternatif kepada model in vitro monolapisan. Walau bagaimana pun kepekatan RECA yang diuji tidak menunjukkan sebarang kesan neurorofik pada saraf tunjang. 2017-08-02T00:00:00Z