Kajian terhadap elemen pengawalaturan huluan yang menyokong ekspresi KLF6 yang berkait dengan penggalak super dalam kanser buah pinggang

Abstract

Ekspresi Kruppel-like factor 6 (KLF6) dalam subjenis kanser sel renal subjenis sel jelas (ccRCC) diaruh oleh super enhancer atau penggalak super (SE). KLF6 memainkan peranan penting dalam mengawal laluan isyarat yang menghubungkan beberapa fenotip utama ccRCC. Penggalak super mempunyai kromatin terbuka yang luas dan diikat oleh pelbagai komponen yang mengawal atur proses epigenetik dan transkripsi aktif gen yang berkaitan. Walau bagaimanapun, komponen yang membentuk dan mengatur landskap penggalak super KLF6 masih kurang jelas. Justeru, tujuan kajian ini adalah untuk mengenalpasti molekul yang berperanan dalam mengawal penggalak super KLF6 dan mengaruh ekspresi tinggi gen ini dalam ccRCC. Bagi mencapai objektif ini, aktiviti pengatur utama penggalak super, BRD4 and P300, direncatkan secara kimia serta kawasan penggalak super dideasetilasi menggunakan teknik CRISPR-dCas9. Selain itu, MEF2C yang merupakan antara calon pengatur huluan KLF6 juga disasarkan secara genetik. Perencatan aktiviti BRD4 dan P300 menjejaskan kadar pertumbuhan sel ccRCC, mengurangkan tahap isyarat H3K27ac dan merendahkan ekpresi KLF6 dan PDGFβ. Deasetilasi beberapa konstituen tunggal penggalak super KLF6 juga mengurangkan tahap isyarat H3K27ac dan ekspresi KLF6. Tahap pengekspresan KLF6 juga berkurang apabila MEF2C disasarkan dengan menggunakan teknik CRISPRi dan RNAi. Ikatan langsung MEF2C di kawasan promoter KLF6 divalidasi menggunakan teknik MEF2C ChIP-qPCR. Pengenalan semula eksogen MEF2C meningkatkan kembali tahap ekspresi KLF6 yang seterusnya mengesahkan peranan MEF2C dalam mengawal atur proses transkripsi KLF6. Namun begitu, penyasaran MEF2C dalam sel ccRCC tidak memberikan kesan ke atas migrasi sel. Selain itu, penyasaran MEF2C menurunkan viabiliti sel secara signifikan selepas rawatan dengan sunitinib, manakala tiada perubahan signifikan diperhatikan dengan everolimus. Tambahan pula, penyasaran MEF2C meningkatkan potensi pembentukan koloni dalam sel ccRCC. Secara kolektifnya, kajian ini merungkaikan peranan BRD4 dan P300 dalam mengekalkan landskap penggalak super yang aktif dan mendorong ekspresi tinggi KLF6 dalam ccRCC. Selain itu, hasil kajian mendapati MEF2C mampu bergabung bersama elemen pengaturan KLF6 dan turut terlibat dalam mengaktifkan transkripsi ekspresi KLF6 dalam ccRCC. Dapat disimpulkan bahawa penemuan ini mengetengahkan petunjuk penting terhadap penghasilan ccRCC yang berkembang disekitar KLF6 yang diaruh oleh penggalak super. Justeru, hasil kajian ini boleh membuka laluan untuk penyelidikan masa hadapan terutamanya dalam pembangunan strategi terapeutik ccRCC baharu.