1. UKM Learning and Research Repository
2. PHD Thesis / Tesis PHD
3. Faculty of Science and Technology / Fakulti Sains dan Teknologi

Title:	Pembangunan Sistem Pengekspresan Protein Rekombinan Dalam Yis Daripada Genus Pichia
Authors:	Douglas Law Sie Nguong (P40982)
Supervisor:	Sheila Nathan, Prof. Dr.
Keywords:	Pembangunan Sistem Pengekspresan Protein Rekombinan Sistem Pengekspresan Protein Rekombinan Pembangunan Sistem Pengekspresan Protein Rekombinan Dalam Yis Daripada Genus Pichia Protein Rekombinan Dalam Yis Daripada Genus Pichia Gene expression
Issue Date:	5-Feb-2013
Description:	Pembangunan sistem pengekpresan yis yang cekap dan bebas paten semakin diperlukan untuk penghasilan protein bagi memenuhi kehendak industri bioteknologi yang sedang berkembang pesat. Maka, objektif kajian ini adalah untuk memencil dan mengenal pasti yis tempatan untuk digunakan sebagai hos pengekspresan, dan membangunkan vektor pengekpresan yang membolehkan proses pengekspresan protein dilakukan dengan menggunakan hos pengekspresan terpilih ini. Tinjauan yang dilakukan ke atas makanan terfermentasi di pelbagai lokasi seluruh Malaysia, telah membawa kepada pengenalpastian strain Pichia anomala YIS11 daripada pulut terfermentasi (tapai nasi). Pencirian lanjutan yang dilakukan ke atas yis tempatan ini menunjukkan kecenderungan untuk hidup pada suhu dan pH di antara 10°C hingga 40°C dan pH 2.5 hingga 11.0, masa penggandaan pada 2 jam 30 minit serta keupayaan mengasimilasi enam jenis sumber karbon berbeza. Keupayaan P. anomala YIS11 untuk ditransformasikan dengan vektor pengekspresan diuji pada peringkat awal dengan memindahkan vektor integrasi p1926Zeo terlinear yang dibina dengan meligasikan jujukan 26S rDNA yis dan kaset kerintangan zeosin pada vektor tulang belakang pUC19. Transforman yang diperoleh mempunyai profil pertumbuhan setara dengan P. anomala YIS11 yang tidak ditransformasikan. Selanjutnya, promoter untuk tiga gen P. anomala YIS11 iaitu, alkohol dehidrogenase 1 (ADH 1), invertase (INV) dan faktor translasi pemanjangan (TEF) dipencil dan digunakan dalam pembinaan kaset pengekspresan yang juga membawa isyarat rembesan faktor pengawanan alfa, terminator gen sitokrom C (CYC) dan gen pelapor kutinase daripada Glomerella cingulata. Sel P. anomala YIS11 ditransformasikan dengan ketiga-tiga vektor pengekspresan rekombinan p1926Zeo-ADH1, p1926Zeo-INV dan p1926Zeo-TEF. Walau bagaimanapun, beberapa percubaan pengoptimuman pengekspresan kutinase rekombinan dalam P. anomala YIS11 menggunakan vektor pengekspresan dibina gagal memberikan produk yang dikehendaki. Sebagai strategi alternatif dalam pembangunan vektor pengekspresan yang baru, vektor pPIG Pichia pastoris dimodifikasi dengan penambahan jujukan nukleotida isyarat rembesan gen mananase (Man5D) dan modul pengikatan selulosa (CBM1) Phanerochaete chrysosporium untuk menghasilkan vektor pPIG-Man. Sebagai pembuktian konsep, penggunaan pPIG-Man sebagai vektor pengekspresan ditunjukkan dengan mengeklon cDNA kutinase G. cingulata ke dalam vektor tersebut dan mengekspreskan kutinase sebagai protein terlarut dalam P. pastoris KM71 pada kepekatan 36 mg/L. Kutinase rekombinan berjaya ditulenkan menggunakan resin Avicel, satu pendekatan alternatif yang lebih berkesan secara kos berbanding kromatografi logam terpegun (IMAC) untuk protein berlabel histidina. Kutinase rekombinan yang ditulenkan mengekalkan ciri-ciri biokimia dan aktiviti enzim relatif sebagaimana yang ditulenkan dengan kromatografi IMAC. Oleh yang demikian, yis novel P. anomala YIS11 yang dikenal pasti daripada makanan fermentasi Malaysia berpotensi digunakan sebagai hos pengekspresan protein rekombinan. Tambahan pula, vektor pengekspresan termodifikasi pPIG-Man P. pastoris yang berupaya menggunakan matriks berkos lebih rendah sebagai sistem penulenan telah dibangunkan. Pembinaan vektor tersebut amat bermanafaat dalam industri berskala besar.,PhD
Pages:	219
Call Number:	QH448 .D648 2013
Publisher:	UKM, Bangi
Appears in Collections:	Faculty of Science and Technology / Fakulti Sains dan Teknologi

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.