Please use this identifier to cite or link to this item:
https://ptsldigital.ukm.my/jspui/handle/123456789/475741| Title: | Pengekspresan gelatinase rekombinan daripada Lysinibacillus sp. strain G6 dan penciriannya bagi mengesan gelatin babi |
| Authors: | Rul Aisyah Mat Repin (P74101) |
| Supervisor: | Sahilah Abdul Mutalib, Prof. Madya Dr. |
| Keywords: | Gelatin babi Bakteria Gelatin |
| Issue Date: | 1-Aug-2018 |
| Description: | Kajian ini dijalankan bertujuan untuk mengenal pasti dan mencirikan enzim gelatinase yang dihasilkan oleh gelatinase rekombinan daripada Lysinibacillus sp. strain G6 untuk mengesan kehadiran gelatin babi. Bakteria yang digunakan adalah bakteria yang berpotensi mencernakan gelatin babi lebih tinggi berbanding gelatin lembu dan ikan. Pengenalpastian gelatinase telah dilakukan secara kaedah ‘in siliko’ (biologi pengkomputeran) iaitu menggunakan analisa bioinformatik. Data mentah separa genom bakteria yang digunakan adalah bersaiz 9.8 pasangan megabes (Mbp). Melalui kaedah analisa bioinformatik, sebanyak 10027 gen protein telah diramalkan. Tiga calon gen gelatinase telah dipilih berdasarkan peratusan (%) persamaan tertinggi dengan gen gelatinase di dalam pengkalan data atas talian UniProtKB/Swiss-Prot dan NCBI iaitu P1: NODE_71_length_93919_cov_158.931839_21 (30.67 %), P2: NODE_23_length_52851_cov_190.061386_17 (28.75 %), P3: NODE_106_length_32943_cov_169.147919_8 (36.40 %). Gen P1 adalah bersaiz 1563 pasangan bes (bp) dan 520 jujukan asid amino, P2 bersaiz 1776 bp dan 591 jujukan asid amino manakala P3 bersaiz 1701 bp dan 566 jujukan asid amino. Tiga primer telah direka untuk analisa reaksi berantai polimerase (PCR). Gen P3 dipilih untuk diklon di dalam hos pengekspresan enzim iaitu bakteria Eschericia coli BL21 Star™ (DE3) One Shot�. Pencirian enzim rekombinan P3 dilakukan menggunakan analisa pemblotan titik (Dot blotting), elektroforesis gel poliakrilamida natrium dodekil sulfat (SDS-PAGE) dan pemblotan Western (Western blotting). Jangkaan jisim molekul protein bagi enzim rekombinan P3 iaitu 137.97 kDa ditentukan menggunakan alatan bioinformatik di atas talian melalui laman web ExPASy. Analisa kehadiran enzim melalui kaedah pemblotan titik berjaya menunjukkan kehadiran enzim rekombinan. Hasil daripada pemisahan molekul protein melalui kaedah analisa SDS-PAGE menunjukkan terdapat protein pada 137.97 kDa. Manakala melalui kaedah analisa pemblotan Western, jisim molekul protein diperoleh adalah pada 30 kDa, ini menunjukkan spesifik enzim rekombinan tidak ditransilasi dan tidak dapat diekspres sepenuhnya. Enzim rekombinan P3 telah diiuji pada piring medium gelatin babi, lembu serta ikan dan dicurahkan dengan 35 % asid trikloroasetik (TCA) untuk memudahkan pengesanan kehadiran enzim gelatinase. Tiada kehadiran aktiviti gelatinase dicatat pada ketiga-tiga jenis piring medium gelatin. Oleh itu, enzim rekombinan yang dihasilkan dalam kajian ini tidak menunjukkan kespesifikasian untuk menghidrolisis gelatin babi, namun kajian ini membantu dalam pengenalpastian gen gelatinase di dalam bakteria Lysinibacillus sp. strain G6.,Tesis ini tidak ada Perakuan Tesis Sarjana/Doktor Falsafah" |
| Pages: | 100 |
| Call Number: | TP965.R838 2018 tesis |
| Publisher: | UKM, Bangi |
| Appears in Collections: | Faculty of Science and Technology / Fakulti Sains dan Teknologi |
Files in This Item:
There are no files associated with this item.
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.