1. UKM Learning and Research Repository
2. Master Thesis / Tesis Master
3. Faculty of Science and Technology / Fakulti Sains dan Teknologi

Title:	Kajian sistem regenerasi padi subspesis indica MR219 dan transformasi menggunakan gen defensin Capsicum annuum (cdef1)
Authors:	Noor Zuhairah Samsuddin (P41558)
Supervisor:	Zamri Zainal, Prof. Madya Dr.
Keywords:	Plant genetic transformation Plant genetics Rice -- Genetics Plant genetic engineering Transgenic plants Crops -- Genetic engineering Universiti Kebangsaan Malaysia -- Dissertations Dissertations, Academic -- Malaysia
Issue Date:	16-Apr-2011
Description:	Kajian dilakukan bertujuan untuk membina sistem regenerasi dan transformasi genetik ke atas tanaman padi subspesis indica MR219. Berdasarkan kajian yang lepas, tiga jenis media dipilih untuk mengaruh kalus embriogenik. Hasil menunjukkan media C yang mengandungi 0.5 g/L prolin, 0.5 g/L glutamin, 0.6 g/L casein hidrolisat dan 2.5 mg/L 2,4-D mempunyai peratus penghasilan kalus embriogenik yang paling tinggi (71.43%). Penambahbaikan media C dilakukan dengan memanipulasi pengawalatur pertumbuhan 2,4-D (0.0 / 3.0 / 5.0 / 7.0 / 10.0 mg/L). Hasil mendapati pada kepekatan 3.0 mg/L 2,4-D, penghasilan kalus embriogenik adalah paling tinggi pada minggu ke-4 iaitu 85%. Kalus embriogenik ini ditentu berdasarkan morfologi kalus yang peroi, kekeringan, berwarna kekuningan serta kalus berbentuk nodul. Ujian histologi turut dilakukan untuk menentusahkan kehadiran kalus embriogenik dimana sel ini mengandungi sel proembrio yang banyak dan tidak bervakuol. Pada peringkat regenerasi, sumber karbon yang berbeza iaitu sukrosa, glukosa, maltosa, manitol dan sorbitol dikaji pada medium MSB5 yang mengandungi 2.0 mg/L BAP dan 0.5 mg/L NAA. Didapati maltosa memberi kesan yang lebih efektif (75%) sebagai sumber karbon pada peringkat regenerasi plantlet. Kemudianya, dua jenis pengawalatur pertumbuhan telah dipilih pada kepekatan yang berbeza (0.0 / 0.5 / 1.5 mg/L) NAA dan (0.0 / 2.0/ 4.0 / 6.0 / 8.0 / 10.0 mg/L) BAP bersama sumber karbon maltosa pada media MSB5. Didapati pada kombinasi 8 mg/L BAP dan 1.5 mg/L NAA memberi peratus penghasilan yang tertinggi iaitu sebanyak 87.5% berjaya membentuk plantlet. Sistem regenerasi yang telah dioptimumkan ini seterusnya digunakan dalam transformasi genetik yang menggunakan jujukan lengkap cDNA bagi gen defensin cili cdef1. Dua konstruk untuk transformasi telah digunakan iaitu vektor pCAMBIA1301 yang membawa gen cdef1 dibawah kawalan promoter ubiquitin, gen β-glucoronidase (gus) sebagai pelapor, dan hpt sebagai gen pemilihan serta vektor pCAMBIA1301 yang membawa gen cdef1 dibawah kawalan promoter CaMV 35S dan hpt sebagai gen pemilihan bersama. Transformasi genetik dilakukan dengan menggunakan kaedah biolistik. Beberapa parameter seperti jarak (6.0 / 9.0 / 12.0 cm) di antara skrin penghalang dengan target sel serta saiz mikropembawa emas (1.0 dan 1.5 βm) telah dimanipulasikan dan ditentu berdasarkan pengasaian gus pada peringkat kalus. Didapati, jarak 9 cm daripada target sel dan saiz 1βm emas memberikan keupayaan transformasi lebih berkesan pada kalus padi. Kalus tertransform putatif turut dilakukan pemilihan pada kepekatan 50 mg/L higromisin secara in vitro. Berdasarkan analisis PCR, sebanyak lima titisan transforman dikenalpasti membawa transgen dimana dua titisan dibawah kawalan promoter CaMV 35S dan tiga titisan dibawah kawalan promoter ubiquitin. Hasil analisis semi-kuantitatif RT-PCR juga turut menunjukkan terdapat pengekspresan gen cdef1 dan gen hpt menggunakan pencetus spesifik gen dan pencetus gen hpt. Hasil yang diperolehi ini menunjukkan gen cdef1 berjaya dipindahkan ke dalam padi MR219 menggunakan kaedah biolistik.,Tesis ini tidak ada Perakuan Tesis Sarjana/Doktor Falsafah,Sarjana Sains
Pages:	102
Call Number:	SB123.57.N637 2011 tesis
Publisher:	UKM, Bangi
Appears in Collections:	Faculty of Science and Technology / Fakulti Sains dan Teknologi

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.