Pemencilan dan pengekspresan gen endoglukanase, egat1 daripada aspergillus terreus SUK-1 dalam pichia pastoris

Siti Nurmi Nasir (P35911)

Please use this identifier to cite or link to this item: https://ptsldigital.ukm.my/jspui/handle/123456789/463798

Full metadata record

DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor	Nik Marzuki Sidik, Prof. Madya Dr.	-
dc.contributor.author	Siti Nurmi Nasir (P35911)	-
dc.date.accessioned	2023-09-25T09:38:52Z	-
dc.date.available	2023-09-25T09:38:52Z	-
dc.date.issued	2012-07-12	-
dc.identifier.other	ukmvital:114484	-
dc.identifier.uri	https://ptsldigital.ukm.my/jspui/handle/123456789/463798	-
dc.description	Kajian lepas telah berjaya memencilkan jujukan separa gen endoglukanase sepanjang 642 pb yang mengkodkan 213 residu asid amino. Jujukan lengkap cDNA endoglukanase telah berjaya dipencilkan melalui kaedah GENE-RACER menggunakan pasangan pencetus yang direka khusus. Jujukan lengkap cDNA gen endoglukanase sepanjang 1412 pb, EGat1 mempunyai satu rangka bacaan terbuka bersaiz 1215 pb mengkodkan 404 residu asid amino. Analisis BlastP dan BlastN ke atas jujukan gen EGat1 telah memberikan nilai kesamaan sebanyak 73-88% kepada jujukan endoglukanase daripada kulat-kulat lain dari pengkalan data GenBank NCBI. Jujukan peptida isyarat protein EGat1 dikenal pasti berada di antara asid amino Met1 hingga Ala16. Analisis kehadiran domain protein menggunakan perisian Domain Terpelihara NCBI menunjukkan kehadiran dua domain penting iaitu domain katalitik (CD) keluarga glikosil hidrolase 5 yang bermula dari Ala35 hingga Val287 dan domain pelekatan selulosa (CBD) kumpulan 1 yang bermula dari His372 hingga Tyr400. Jujukan pengkodan EGat1 tanpa peptida isyarat (EGat1N) telah diamplifikasikan dengan menggunakan pasangan pencetus spesifik. Antara objektif penyelidikan ini ialah mendapatkan jujukan lengkap cDNA endoglukanase dan mengklonkan cDNA tersebut ke dalam sistem P. pastoris. Oleh itu, EGat1N diklonkan ke dalam vektor pengekspresan pPICZαA menghasilkan plasmid rekombinan pPICZα-egat1 dan ditransformasikan ke dalam Pichia pastoris untuk pengekspresan gen. Pengekspresan EGat1N dalam P. pastoris dikawal oleh promoter AOX1 dan aktiviti endoglukanase protein disahkan melalui pengasaian enzim. Aktiviti enzim yang tertinggi dicatatkan pada hari ke-4 selepas diinokulasi iaitu sebanyak 2.367 x 10-1 U/mL enzim yang dihasilkan. Elektroforesis SDS-PAGE menunjukkan kehadiran jalur bersaiz 43.3 kDa seperti yang dijangkakan. Analisis zimogram membuktikan kehadiran aktiviti endoglukanase pada tiga jalur pada gel bersaiz di antara 66.4 - 42.7 kDa. P. pastoris menghasilkan enzim paling banyak pada hari keempat selepas pengkulturan dengan kehadiran 1 % metanol. Asai enzim menunjukkan suhu optimum enzim adalah pada suhu 70 °C. Kajian kestabilan menunjukkan aktiviti enzim masih berjaya dikesan selepas eraman 60 minit pada suhu 80 °C. pH optimum untuk aktiviti enzim adalah pada pH 9. Enzim masih mengekalkan 60 % aktivitinya selepas disimpan pada pH 4.0-9.0 semalaman pada suhu 4°C. Penyimpanan pada pH 10.0 menurunkan aktiviti dengan sangat ketara.,Tesis ini tidak ada Perakuan Tesis Sarjana/Doktor Falsafah,Sarjana Sains	-
dc.language.iso	may	-
dc.publisher	UKM, Bangi	-
dc.relation	Faculty of Science and Technology / Fakulti Sains dan Teknologi	-
dc.rights	UKM	-
dc.subject	Cellulose	-
dc.subject	Aspergillus fumigatus	-
dc.subject	Universiti Kebangsaan Malaysia -- Dissertations	-
dc.subject	Dissertations, Academic -- Malaysia	-
dc.title	Pemencilan dan pengekspresan gen endoglukanase, egat1 daripada aspergillus terreus SUK-1 dalam pichia pastoris	-
dc.type	theses	-
dc.format.pages	165	-
dc.identifier.callno	QK625.M7S593 2012 tesis	-
dc.identifier.barcode	002297(2012)	-
Appears in Collections:	Faculty of Science and Technology / Fakulti Sains dan Teknologi

Files in This Item:

File	Description	Size	Format
ukmvital_114484+SOURCE1+SOURCE1.0.PDF Restricted Access		12.11 MB	Adobe PDF	View/Open

Show simple item record Recommend this item