1. UKM Learning and Research Repository
2. Master Thesis / Tesis Master
3. Faculty of Science and Technology / Fakulti Sains dan Teknologi

Title:	Peranan hsa-miR-5088-5p dalam pengawalaturan gen G6PD bagi model Orang Asli Negrito
Authors:	Syarifah Anis Wafa Syed Mohd Azmi (P70750)
Supervisor:	Endom Ismail, Prof. Madya Dr.
Keywords:	Enzim G6PD Orang Asli Negrito hsa-miR-5088-5p Universiti Kebangsaan Malaysia -- Dissertations Dissertations, Academic -- Malaysia
Issue Date:	4-Oct-2019
Description:	Kekurangan enzim G6PD merupakan enzimopati paling lazim berlaku pada hampir 500 juta penghidap di seluruh dunia. Di Malaysia, Orang Asli (OA) Negrito lelaki mempunyai kelaziman paling tinggi iaitu sebanyak 11.0 % berbanding 4.7 % dalam lelaki bagi keseluruhan tiga etnik utama di Malaysia. Telah didapati bahawa 83.3 % OA Negrito mempunyai satu mutasi senyap dan dua perubahan nukleotida lain dalam gen G6PD nya. Mutasi senyap dan perubahan nukleotida pertama terletak dalam ekson 11 (c.1311C>T) dan intron 11 (IVS11T93C) nya masing-masing. Perubahan nukleotida kedua pula terletak di jujukan tidak tertranslasi 3' (3'-UTR) (rs1050757G). Mutan 3'-UTR (rs1050757G) ini dipercayai berpotensi menyebabkan kekurangan G6PD melalui mekanisme pengawalaturan mikroRNA (miRNA) spesifik. Oleh itu, objektif bagi kajian ini adalah untuk mengenalpasti miRNA endogen yang mengikat di kawasan 3'-UTR ini. Penyaringan SNP pada kawasan di sekitar 3'-UTR dalam transkrip RNA telah dilakukan dengan kaedah PCR RACE 3'. Ramalan pengikatan miRNA putatif di sekitar rs1050757G telah menggunakan empat atur cara bioinformatik iaitu TargetScan, PITA, miRanda dan RegRNA 2.0. Sampel RNA OA juga telah dihantar untuk penjujukan RNA kecil (sRNA). MiRNA mimik kemudiannya dipilih dan fungsi miRNA ini telah dianalisis secara tindak balas transkripsi dan translasi in vitro menggunakan vektor pelapor lusiferase. Amplikon hasil kejayaan RNA RACE 3' yang dijujuk telah mengesahkan kehadiran rs1050757G dalam OA. Analisis bioinformatik pula mendapati tiga miRNA iaitu hsa-miR-662, hsa-miR-572 dan hsa-miR-4646-3p mungkin berperanan dalam pengawalaturan mRNA G6PD. Penjujukan RNA kecil pula mendapati terdapat 143 miRNA yang mengalami perbezaan secara signifikan dari segi pengekspresannya di antara transkrip normal dan abnormal pada nilai q < 0.001 dengan lipat ganda perubahan log2 < -2 atau > 2. Perbandingan data pengekspresan miRNA dan ramalan pengikatan miRNA pada struktur sekunder mRNA G6PD telah menemukan miRNA hsa-miR-5088-5p sebagai calon yang berpotensi memberikan penindasan pengekspresan dalam model G6PD mutan rs1050757G. Vektor pelapor pRL_G6PD_N (normal) dan pRL_G6PD_D (mutan) kemudiannya telah berjaya dikonstruk untuk tujuan pengasaian berfungsi in vitro. Tindak balas transkripsi dan translasi in vitro ke atas kedua-dua vektor bersama miRNA mimik hsa-miR-5088-5p telah menunjukkan hasil terbaik pada nisbah kemolaran vektor pelapor ke miRNA mimik sebagai 1 ke 0.5. Pengekspresan lusiferase bagi konstruk mutan menunjukkan bacaan lebih rendah secara signifikan jika dibandingkan dengan konstruk normal (p < 0.05). Dapatan ini memberikan petunjuk bahawa miRNA hsa-miR-5088-5p terlibat dalam pengawalaturan enzim G6PD dalam Negrito yang membawa mutan rs1050757G.,Sarjana Sains
Pages:	170
Publisher:	UKM, Bangi
Appears in Collections:	Faculty of Science and Technology / Fakulti Sains dan Teknologi

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.